猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立

• 作者: 丛喆 于浩 佟巍 孙敏 涂新明 蒋虹 魏强
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 医学
• 关键词: β逆转录病毒 聚合酶链反应 检测
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 287-289
• 页数: 3页
• 分类号: R373.5
• 字数: 2633字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2006.04.011

摘要

目的 建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用.方法 针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应.扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对.将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PGR反应的灵敏度.使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性.用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本.结果 使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致.所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3 ng/μL,而且方法特异.用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本.结论 初步建立SRV-1的巢式PGR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段.