腺病毒介导反义RNA抑制HIV-1辅助受体CCR5和CXCR4表达

• 作者: 于敏 卜定方 张政 徐小元 李文刚 田秀兰 白丽
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 重组腺病毒 辅助受体 反义RNA 抑制
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 626-631
• 页数: 6页
• 分类号: R512.91
• 语种: 中文

摘要

目的 抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HW-1)的辅助受体CCR5和CXCR4表达,阻止HIV-1进入靶细胞.方法 逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1辅助受体基因5'-端cDNA片段,反向插入穿梭质粒中,再与腺病毒基因组骨架质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组,重组质粒在293细胞中包装、扩增得到含有CCR5、CXCR4反义RNA的重组腺病毒,分别感染U937细胞和MT4细胞,于感染后24、48和72 h及10 d时用流式细胞仪检测细胞表面相应受体的表达.并用Boyden小室法检测重组腺病毒感染对细胞趋化活性的影响以及用3H掺入法检测对细胞增殖能力的影响.结果 成功获得含有CCR5和CXCR4反义RNA的重组腺病毒,其滴度为5×1011PFU/ml和7×101o PFU/ml.重组腺病毒感染24 h后流式细胞仪检测显示,U937细胞表面CCR5的表达率分别为:Ad-antiR5 1.12%,未感染细胞对照82.10%,Ad-senseR5 80.94%,Ad-control 81%.MT4细胞表面CXCR4的表达率分别为:Ad-antiX4 1.03%,未感染细胞对照42%,Ad-senseX4 44%,Ad-control 39%.48、72 h及10 d后Ad-antiR5感染的U937细胞表面CCR5表达率分别为:1.02%、1.26%、1.23%;Ad-antiX4感染的MT4细胞表面CXCR4表达率分别为:1.13%、1.17%、1.22%.感染重组腺病毒后,两种细胞的趋化活性及增殖能力均无改变.结论 包含有CCR5、CXCR4反义RNA的重组腺病毒可以使细胞表面相应受体表达下降,且重组腺病毒不影响细胞的趋化活性和增殖能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐小元	北京大学第一医院感染疾病科	159	1064	17.0	25.0
2	于敏	北京大学第一医院感染疾病科	45	362	11.0	17.0
3	卜定方	北京大学第一医院感染疾病科	108	881	15.0	24.0
4	张政	北京大学第一医院感染疾病科	12	174	5.0	12.0
5	李文刚	北京大学第一医院感染疾病科	8	38	4.0	5.0
6	田秀兰	北京大学第一医院感染疾病科	15	105	5.0	9.0
7	白丽	北京大学第一医院感染疾病科	9	57	4.0	7.0