人NKG2D的基因克隆及其在CHO细胞中的表达

• 作者: 张建华 张彩 游力 王郡甫 许晓群 赵昌盛 陈雪梅
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NKG2D受体 基因转染 基因表达 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 447-449
• 页数: 3页
• 分类号: R392
• 字数: 2602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.04.011

摘要

目的: 构建重组人NKG2D真核表达载体并在CHO细胞表达重组人NKG2D.方法: 用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段,克隆到pGEM-T Easy载体并对克隆的DNA片段进行序列分析.用限制内切酶EcoR I和BamH I消化pGEM-T Easy/NKG2D重组质粒,分离NKG2D片段,并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1/NKG2D.然后经脂质体介导转染CHO细胞.应用荧光显微镜观测、Western blot方法和免疫组化染色对转染细胞内pEGFP-N1/NKG2D的表达进行鉴定.结果: RT-PCR扩增获得650 bp基因片段,经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致.转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光,Western blot分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合;免疫组化检测显示,转染的CHO中有棕色颗粒,证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达.结论: 构建了人NKG2D的哺乳动物细胞表达载体,并成功地在CHO细胞中获得重组人NKG2D的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	游力	山东省医学科学院基础医学研究所	17	101	6.0	9.0
2	许晓群	山东省医学科学院基础医学研究所	71	519	12.0	19.0
3	张彩	山东省医学科学院基础医学研究所	36	208	9.0	13.0
4	张建华	山东省医学科学院基础医学研究所	36	221	9.0	13.0
5	王郡甫	山东省医学科学院基础医学研究所	31	214	8.0	13.0
6	陈雪梅		15	51	5.0	5.0
7	赵昌盛		7	102	4.0	7.0