TIMP-2逆转录病毒载体的构建及表达

• 作者: 何军 岑建农 李振江 邱桥成 陈子兴
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型基质金属蛋白酶抑制剂2 聚合酶链反应 逆转录病毒载体 载体构建 基因转染 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 185-187,199
• 页数: 4页
• 分类号: R392-33|R733.702
• 字数: 2891字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0399.2006.02.004

摘要

目的构建人组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)编码序列基因逆转录病毒表达载体,转染人单核细胞白血病细胞株,为探讨TIMP-2的生物学功能奠定基础.方法根据基因库中已公布的序列设计引物,用PCR方法扩增出人TIMP-2编码序列基因片段,用限制性内切酶及T4连接酶将目的片段插入MSCV逆转录病毒载体中.采用酶切和PCR鉴定及测序后经脂质体介导转染至PT67包装细胞中,以病毒上清感染单核细胞白血病细胞株SHI-1,G418筛选,极限稀释法挑选单克隆细胞株,定量PCR和Western Blotting检测TIMP-2的表达.结果 TIMP-2基因克隆进逆转录病毒载体MSCV中,经酶切、PCR和DNA测序证实重组逆转录病毒载体构建正确,病毒上清感染SHI-1细胞,经G418筛选并挑选出单克隆细胞,经实时定量PCR和Western Blotting检测发现SHI-1细胞中TIMP-2 mRNA及蛋白表达明显上调.结论成功构建了高表达TIMP-2的SHI-1细胞,可对其生物学行为作进一步研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈子兴	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	103	387	10.0	12.0
2	邱桥成	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	17	68	6.0	7.0
3	岑建农	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	91	384	11.0	13.0
4	何军	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	83	300	9.0	11.0
5	李振江	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	3	3	1.0	1.0