用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体

• 作者: 沈茜 管政
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重叠延伸PCR法 中间缺失突变体 MHCⅡ类分子反式激活因子
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1014-1017
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2006.09.022

摘要

目的:以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC classⅡmolecule transactiva-tor,CⅡTA)突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法.方法:首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段,再将两片段混合,在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸,然后再加入引物进行目的片段指数扩增,将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES.结果:成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体.结论:优化后的重叠延伸PCR法(OE-PCR)克服了传统方法的诸多弊端,非常适合于构建中间缺失突变体,值得推广.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈茜	第二军医大学长海医院实验诊断科	184	1189	17.0	25.0
2	管政	第二军医大学长海医院实验诊断科	5	8	2.0	2.0