基于DNA的Semliki森林病毒复制子载体体内外高水平表达外源基因

• 作者: 余云舟 俞炜源 刘志刚 孙志伟
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: semliki森林病毒 RNA复制子 DNA 重组病毒颗粒 疫苗
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 87-94
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 5790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2006.01.014

摘要

基于DNA的复制子载体显著地提高了复制子载体的应用范围,在体外可用于高水平表达外源基因,大规模制备重组病毒颗粒,在体内可用于复制子疫苗和基因治疗载体研究.将复制子RNA的cDNA置于RNA聚合酶Ⅱ启动子和转录终止子控制下时,基于RNA的复制子载体可转变为基于DNA的复制子载体.当DNA载体转染细胞后,第一阶段,RNA聚合酶Ⅱ启动子在核内起始合成RNA,经过加工和修饰后运输到细胞质中,相当于复制子RNA,第二阶段,该RNA自我复制及表达外源基因,相当于病毒RNA复制循环.在成功地构建了基于DNA和RNA的双功能复制子表达载体pSCTA和辅助载体pSHCTA的基础上,为了获得高效的基于DNA的复制子载体,对其进行改进而构建了共4种不同的基于DNA的semliki森林病毒复制子,通过对表达载体和相应的辅助载体表达报告基因及对制备重组病毒颗粒的能力进行比较,获得了复制能力提高的复制子载体pSCAR和pSHCAR.该表达载体pSCAR可高水平表达外源基因,与辅助载体pSHCAR共转染可制备高滴度的重组病毒颗粒,并且也能表达抗原基因.另外,报告基因在DNA复制子载体注射的小鼠体内得到了高水平表达,并且DNA免疫小鼠后也诱导产生高滴度特异性抗体以及细胞免疫反应.结果表明,经过改造SFV复制子载体,获得了高效的基于DNA的SFV复制子载体.该复制子载体增强了原复制子载体应用能力,并有潜力作为复制子疫苗和基因治疗载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余云舟	军事医学科学院生物工程研究所	23	111	6.0	9.0
2	俞炜源	军事医学科学院生物工程研究所	87	518	11.0	17.0
3	孙志伟	军事医学科学院生物工程研究所	68	390	10.0	16.0
4	刘志刚	军事医学科学院生物工程研究所	21	138	7.0	10.0