表达GFP基因的马立克氏病病毒(MDV) 转移载体的构建及初步应用

• 作者: 张雪莲 葛菲菲 邱亚峰 陈溥言
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 马立克氏病病毒 绿色荧光蛋白 LoxP位点 重组病毒
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 3314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.05.003

摘要

利用Primer primer 5.0软件设计两条引物,将loxP位点分别引入正、反向引物,以质粒载体pIRES-gpt为模板,扩增获得LoxP-CMV-gpt-IRES-LoxP基因表达盒(约2.9kb),将其克隆入质粒pBUS10(含有MDV US10区)的BalⅠ位点,获得重组质粒pUS-gptIRES(L);对重组质粒pUSgptIRES(L)进行测序分析,发现两同向的loxP位点正确插入到pUS-gptIRES(L)中;将含有完整的GFP基因以及poly A尾的基因片段,连入pUS-gptIRES(L)中,把gpt基因替换掉,从而获得重组质粒pUS-GFPIRES(L).将转移载体pUS-GFPIRES(L)瞬时转染CHO细胞,可以观察到绿色荧光,说明GFP基因获得有效表达;将pUS-GFPIRES(L)转染已感染MDV CVI988株的CEF细胞,可以筛选到表达绿色荧光蛋白的重组病毒;通过测定重组病毒在细胞上的生长曲线,发现重组病毒与亲本毒生长曲线相吻合.为进一步探讨MDV在体内的特性奠定基础,同时,为Cre/LoxP重组酶系统在MDV中的应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈溥言	南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室	269	2875	28.0	40.0
2	葛菲菲	南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室	11	31	3.0	5.0
3	邱亚峰	南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室	10	21	3.0	4.0
4	张雪莲	南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室	14	109	8.0	10.0