牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

• 作者: 朱远茂 李兆利 王延辉 薛飞
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: IBRV gB基因 表达 纯化 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1328-1333
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65|S854.4
• 字数: 4860字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2006.12.016

摘要

经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列.将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21.SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符.亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%.间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性.以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法.确定的抗原包被浓度为50 μg/mL,血清的最佳稀释度为1:40,阳性标准定为S/P＞0.395.交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应.与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%.上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆利	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	2	45	2.0	2.0
5	薛飞	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	16	107	7.0	10.0
6	朱远茂	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	14	97	5.0	9.0
7	王延辉	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	2	36	2.0	2.0