运用重叠PCR技术构建HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体

• 作者: 吕欣 孙梦宁 尹文 杨敬 胡兴斌 薛小平 雷迎峰 韦三华
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 重叠延伸PCR 定点突变 细胞培养
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 27-30
• 页数: 4页
• 分类号: Q503|R373.2
• 字数: 3411字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2006.01.009

摘要

目的:构建含有不同组合细胞培养适应性突变的丙型肝炎病毒(HCV)全长基因组cDNA.方法:根据HCV全长基因组cDNA序列及突变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法对ns3和ns5a基因的E1202G、T1280I和S2197P位点进行细胞培养适应性突变,将突变后的片段分别克隆入pBluescripIIKS(+)、pRSET-A载体,经测序正确后,分别连入含有HCV全长cDNA的质粒的H/FL相应位置,置换原未突变片段,并进行PCR及酶切鉴定.结果:经PCR、酶切和DNA序列测定证实,预期位点发生突变,而其他序列未发生随机突变.结论:构建了含有不同组合细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA突变体,为HCV在细胞内复制机制的研究和可稳定复制、表达的HCV体外培养体系的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹文	第四军医大学微生物学教研室	264	1718	18.0	25.0
2	吕欣	第四军医大学微生物学教研室	48	174	7.0	10.0
3	雷迎峰	第四军医大学微生物学教研室	60	194	7.0	10.0
4	胡兴斌	第四军医大学微生物学教研室	65	266	9.0	12.0
5	韦三华	第四军医大学微生物学教研室	25	111	6.0	9.0
6	薛小平	第四军医大学微生物学教研室	27	202	8.0	13.0
7	孙梦宁	第四军医大学微生物学教研室	9	26	3.0	5.0