一种亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型的建立

• 作者: 于新荣 张睢扬 梅开城 王东霞 王爱娥 王英 闫春莲 马建新
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 多聚谷氨酰胺(polyQ) 亨廷顿舞蹈症(HD) 蛋白溶解性 氯霉素乙酰基转移酶 细胞模型
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4009字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.10.004

摘要

为建立以多聚谷氨酰胺(polyQ)为靶点的亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型,以随机引物PCR法克隆了不同长度的CAG片段,经序列测定正确后,分别融合到已经建立的氯霉素抗性融合蛋白表达系统pCAR中CAT的N端.重组质粒转化大肠杆菌,并在其中诱导表达,SDS-PAGE和氯霉素抗性平板试验对目的蛋白可溶性与氯霉素活性进行测定.结果显示长度在40以上的polyQ为不溶性包涵体表达,表现为低水平的氯霉素抗性,40以下的polyQ则以可溶形式表达,表现为高水平氯霉素抗性,从而建立起能够模拟亨廷顿舞蹈症病理过程的体外细胞模型.通过检测模型细胞的氯霉素抗性,可以定性、定量地反映polyQ在体内的折叠状态和可溶性,故可以借助该模型对促溶药物或生物活性物质进行高通量筛选,为亨廷顿舞蹈症预防、诊断、治疗提供了新思路.