鲢(Hypophthalmichthys molitrix)IL-10基因的克隆及表达分析

• 作者: 孙军 昌鸣先 聂品 肖凡书 肖调义
• 来源期刊: 自然科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 鲢 IL-10 克隆 组织表达 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 学术论文
• 页码范围: 183-189
• 页数: 7页
• 分类号: Q95
• 字数: 4264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-008X.2006.02.008

摘要

白细胞介素10(IL-10)是一种作用广泛的抗炎细胞因子,主要功能是限制和最终终止炎症反应.用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10(IL-10)的cDNA,其全长为1248nt,包含5'非编码区156nt,3'非编码区552nt,开放阅读框540nt.鲢IL-10的开放阅读框编码179个氨基酸,其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸.RT-PCR结果显示鲢IL-10mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达.将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c(+)上,转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39 ku处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不可溶的包涵体形式存在.变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体,Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合.这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂品	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	65	861	13.0	28.0
2	肖调义	湖南农业大学动物科技学院	178	1838	23.0	34.0
3	孙军	暨南大学水生生物研究所	25	237	9.0	15.0
4	肖凡书	湖南农业大学动物科技学院	5	54	5.0	5.0
6	昌鸣先	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	7	124	5.0	7.0