斜带石斑鱼IL-10基因的克隆及其原核表达

• 作者: 吴灶和 简纪常 肖周婷 鲁义善 黄郁葱
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 斜带石斑鱼(Epinephelus coioides) Interleukin-10 基因克隆 重组表达
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 131-137
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.09.018

摘要

白介素10（Interleukin-10，IL-10）是一个重要的多效细胞因子，主要作用是介导炎症反应和调控一些免疫细胞的分化和增殖。利用同源克隆和RACE-PCR技术获得全长为1104 bp的斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）IL-10基因。该基因ORF为564 bp，编码187个氨基酸，预测蛋白分子量为21.7 kD，等电点为5.74。氨基酸同源性比对及进化分析结果显示，斜带石斑鱼IL-10氨基酸序列和吉富罗非鱼（O. niloticus）同源性最高，达72.25%。利用双酶切及质粒重组技术构建IL-10原核表达载体，并转化大肠杆菌BL21（DE3）中诱导原核表达。SDS-PAGE分析显示，融合蛋白分子量为37.5 kD，与预期相符；在IPTG为0.02 mmol/L，37℃诱导3 h，蛋白包涵体的表达量最大。