斜带石斑鱼干扰素调节因子1基因的克隆及其原核表达

• 作者: 史燕 尹经逵 朱新平
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 斜带石斑鱼 IRF-1基因 分子克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 668-677
• 页数: 10页
• 分类号: S9
• 字数: 5362字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2009.05.004

摘要

对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的干扰素调节因子1(Interferon regulatory factor 1,IRF-1)基因进行了克隆、测序及原核表达.以PBS做对照,利用polvI:C刺激斜带石斑鱼,然后取其肝脏、头肾、脾脏提取总RNA,随机引物反转录获得cDNA.根据相近物种IRF-1的保守序列设计引物,通过PCR得到了保守片段,通过RACE-PCR获得了斜带石斑鱼IRF-1基因的全长cDNA.基因全长为1 730 hp,完整开放阅读框(ORF)906 bp,编码302个氨基酸,5'非编码区153 bp,3'非编码区671 bp.将斜带石斑鱼ORF与其他物种进行比对发现,与海鳜(Siniperca chuatsi)同源性最高,为85%.将根据斜带石斑鱼IRF-1 ORF推测的氨基酸序列与其他物种进行比对,发现斜带石斑鱼与海鳜同源性为90%,与金头鲷(Sparus aurat)为88%,与乌鳢(Channa argus)为86%,与大菱鲆(Scophthalmus maximus)为82%.利用ORF序列,构建原核重组表达质粒.重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白成功表达,表达蛋白的分子量约55 kD.诱导温度为30℃时,重组蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱新平	中国水产科学研究院珠江水产研究所	108	1263	20.0	29.0
3	史燕	中国水产科学研究院珠江水产研究所	7	30	4.0	5.0
6	尹经逵	广东海洋大学水产学院	1	6	1.0	1.0