小鼠脾脏内皮祖细胞的分离和培养

• 作者: 刘兰 周健 尹扬光 崔斌 方玉强 朱光旭 赵晓辉 陈剑飞 黄岚
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 细胞培养 脾脏 小鼠
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 532-535
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 2845字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7236.2006.05.014

摘要

目的 探讨小鼠脾脏内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的体外分离,定向分化和培养方法.方法 梯度密度离心法从小鼠脾脏中分离单个核细胞,用含血管内皮生长因子的M199培养液培养,每4 d更换培养基去除非贴壁细胞,观察经过不同时间培养后的细胞形态、结构和功能变化.结果 培养4 d可发现梭形贴壁细胞,7d后细胞成集落状,14 d左右可观察到条索状、网状血管样结构,原代细胞培养21 d左右接近融合并呈典型的鹅卵石样排列.培养7 d透射电镜可见特征性的Weible-Palade小体存在,细胞CD31表达阳性,细胞DiI-LDL摄取试验阳性,FITC-UEA-Ⅰ染色阳性;流式细胞仪检测细胞Sca-1及VEGFR-2的总阳性率分别为(34.6±3.8)%和(50.5±4.9)%,且该细胞具有体外成血管能力.结论 通过密度梯度离心联合贴壁筛选可以获得脾脏EPC.