人胰高血糖素样肽-1突变体基因的构建和表达

• 作者: 丁振兴 刘莉 王佑民 胡红琳
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胰高血糖素/遗传学 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 632-635
• 页数: 4页
• 分类号: R349.83
• 字数: 2903字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2006.06.009

摘要

目的 构建人胰高血糖素样肽-1突变体(2Gly-hGLP-1)基因,并表达GST2-Gly-hGLP-1.方法 用限制性内切酶双酶切载有hGLP cDNA的重组克隆质粒PMD18T simple和原核表达质粒pGEX-4T-1,将GLP-1定向插入原核表达载体pGEX-4T-1+中,筛选出阳性克隆.在获得重组hGLP-1基因工程菌的基础上,利用定向突变的技术改造其第2位丙氨酸为甘氨酸,经酶切克隆于pGEX-4T-1+中,构建pGEX-4T-1+/2Gly-hGLP-1表达载体.转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达.结果 经测序分析,证明2Gly-hGLP-1已经克隆到pGEX-4T-1+中.Western blot证实,该蛋白可被特异性hGLP-1识别.结论 成功构建和表达了人胰高血糖素样肽-1突变体原核表达质粒.