小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响

• 作者: 徐军发 方敏 沈关心 熊平 赵坤 黄保军 龚非力
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 B/T淋巴细胞弱化因子 B7分子 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 413-416
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3060字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.04.001

摘要

目的: 研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/ T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBTLAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响.方法: 采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mBTLA cDNA.将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coli BL21 (DE3),以1 mmol/L的IPTG诱导表达.提取包涵体,经变性、负性后,采用Glutathione Sepharose 4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext.将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响.结果: 成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体.变性、复性,经Glutathione Sepharose 4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白.经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43 000,同预期的结果一致.流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断.未检测到GST-mBTLAext DC2.4上B7-2的表达有影响.结论: BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义.