小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘伟 张良清 徐军发 肖德乾 肖欢 胡国艳 那志萍 郑淑华
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: B7-H4 原核表达载体 基因表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 481-484
• 页数: 4页
• 分类号: R392.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2009.05.001

摘要

目的 探讨小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备.方法 采用特异性引物扩增小鼠B7-H4(mB7-H4)胞外功能区DNA,经酶切、拼接构建原核表达载体pET28a-mB7-H4.将构建的重组表达质粒转化入E.coli BL21 (DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度.将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定.结果 序列测定证实了构建的pET28a-mB7-H4重组表达载体含有mB7-H4编码序列,其序列分析与GenBank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为26.5 KD的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯.双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶12 800,Western blot分析显示抗体能特异性结合mB7-H4.结论 成功制备了高表达重组mB7-H4蛋白的原核表达载体及高效价抗mB7-H4多克隆抗体,为进一步研究B7-H4的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐军发	广东医学院检验医学研究所	114	719	13.0	20.0
2	张良清	广东医学院附属医院麻醉科	70	620	13.0	23.0
3	那志萍	广东医学院附属医院麻醉科	4	48	2.0	4.0
4	郑淑华	广东医学院检验医学研究所	18	129	6.0	11.0
5	胡国艳	广东医学院检验医学研究所	12	112	6.0	10.0
6	肖德乾	广东医学院检验医学研究所	11	59	5.0	7.0
7	刘伟	广东医学院检验医学研究所	19	144	7.0	11.0
8	肖欢	广东医学院检验医学研究所	4	44	2.0	4.0