FAdV-4 NP株F1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 屈贵蜀 彭尧舜 王全溪 许丽惠 陈媛
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 禽腺病毒血清4型 F1基因 原核表达 密码子优化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 614-618
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2019.05.012

摘要

根据FAdV-4 NP株F1蛋白编码框的主要抗原位点,设计一对特异性引物,经PCR扩增、测序,分析表达效率后,进行密码子优化;以合成的新序列作为模板,构建重组表达质粒pET-32a-F1,将质粒转化到BL21中,筛选诱导条件,Western blot鉴定表达产物;将待纯化蛋白依次经过不同浓度的咪唑洗脱,纯化重组蛋白;最后将纯化后的蛋白免疫新西兰黄兔,收集血清并用间接ELISA法测定抗体效价.结果表明,所设计的特异性引物扩增了一条约699 bp的片段.PCR验证和酶切鉴定表明,pET-32a-F1被成功构建,并能够高效表达.重组质粒pET-32a-F1诱导的最佳IPTG浓度为0.3 mmol·L-1,最佳诱导时间为5 h,最佳诱导温度为37℃;咪唑洗脱浓度为80 mmol·L-1时,能获得较单一的洗脱蛋白.此外,本试验制备的F1多克隆抗体的效价可达1:1024000.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王全溪	福建农林大学动物科学学院	82	817	14.0	27.0
2	许丽惠	福建农林大学动物科学学院	21	235	9.0	15.0
3	屈贵蜀	福建农林大学动物科学学院	3	0	0.0	0.0
4	陈媛	福建农林大学动物科学学院	5	5	2.0	2.0
5	彭尧舜	福建农林大学动物科学学院	3	2	1.0	1.0