秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 刘永生 吴润 姜海霞 张杰 朱小玲 谢庆阁 路伟 陈豪泰
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 牛海绵样脑病 成熟朊蛋白 单克隆抗体 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 851-854
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3471字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.09.014

摘要

目的 制备及鉴定抗秦川黄牛成熟朊蛋白的单抗.方法 用重组成熟朊蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以间接ELISA方法筛选能够稳定分泌抗成熟朊蛋白的单抗的杂交瘤细胞株.以亲和层析法纯化腹水抗体,检测其Ig类和亚类、效价、相对亲和力以及特异性,并用基因片段表达作图法初步分析抗原表位.结果 获得了能够稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×105,相对亲和力为0.15μg/ml,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应.结论 抗牛成熟朊蛋白的腹水单抗N64效价高、亲和力和特异性强,可以作为疯牛病免疫诊断的核心试剂.