雄激素应答元件陷阱DNA抑制PSA基因启动子的作用并诱导LNCaP细胞凋亡

• 作者: 姜安丽 张建业 张鹏举 苑辉卿 贺美兰 郭强 陈蔚文
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 雄激素应答元件 转录因子 基因,报告 LNCaP细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1324-1329
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 1238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.07.015

摘要

目的:研究雄激素应答元件陷阱DNA(ARE decoy)对前列腺特异抗原(PSA)基因启动子的抑制作用及其对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响,为前列腺癌的基因治疗寻求新的策略.方法:联合运用报告基因和陷阱DNA策略,构建含PSA基因5'侧启动子区640 bp DNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA,ARE陷阱DNA共转染前列腺癌细胞株PC3-M.应用双荧光素酶测定系统,检测荧光素酶的表达活性.然后,应用2 mg/L AREdecoy转染LNCaP细胞,通过相差显微镜观察细胞超微结构变化,MTT比色法检测细胞生长活性,DNA ladder和流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡以研究ARE decoy DNA对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响.同时提取LN-CaP细胞核蛋白,应用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测ARE decoy DNA与雄激素受体的特异结合.结果:ARE de-coy DNA显著抑制报告基因荧光素酶的表达,抑制率可达95%.EMSA显示ARE decoy DNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合.LNCaP细胞转染ARE decoy DNA后,镜下观察部分细胞出现凋亡形态学的改变,细胞体外生长受到抑制,染色体DNA凝胶电泳可见明显梯形条带.转染48h的凋亡率为22.4%.结论:实验表明ARE decoy DNA能竞争结合雄激素受体(AR),阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡,有可能为前列腺肿瘤的治疗提供新的策略.