新增V元件插入位置对WGFS启动子转录特性的影响

• 作者: 华丽君 李恒 黄俊文 黄真池
• 来源期刊: 东北林业大学学报
• 关键词: 桉树 改良启动子 WGFS 水杨酸 青枯菌 疫霉菌
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: S722
• 语种: 中文

摘要

通过顺式作用元件类型的选择和元件间的位置关系的排列组合有望筛选出理想的人工启动子.以本底低、诱导活性相对较高的WGFS为基础,在其序列的上游、中游和下游分别插入V元件二聚体,设计出VWGFS、WGVFS、WGFSV 3个改良启动子.用改良启动子替换质粒pBI121中调控gus基因表达的CaMV35S启动子,得到重组质粒后导入农杆菌GV3101.用农杆菌渗入法转化尾叶桉、广林9号桉和广州1号桉的叶盘,48 h后用GUS染色法检测启动子本底活性.染色结果显示:与原WGFS启动子相比,插入V元件明显改变了启动子的本底表达活性;当V元件插入在原启动子下游时得到的WGFSV启动子本底活性显著升高.以尾叶桉叶盘为材料,用农杆菌侵染后共培养24 h,再用水杨酸、青枯菌或疫霉菌孢子诱导处理24 h,提取总RNA、反转录得cDNA,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测改良启动子的诱导转录活性.设原WGFS启动子的本底转录活性为1,qRT-PCR结果显示:当V元件插入在中游时得到的WGVFS启动子本底活性最低,为1.17;当V元件插入在下游时得到的WGFSV启动子本底活性最高,达5.63;VWGFS受水杨酸和青枯菌的诱导后转录活性升高较明显;青枯菌和疫霉菌孢子对WGFSV的诱导效果较好;水杨酸、青枯菌和疫霉菌孢子均可使WGVFS的转录活性显著升高.结果表明:新增元件插入位置显著影响原启动子的本底转录活性;新增元件插入到原启动子的中游时,本底转录水平变化较小,且能保留对原有诱导因子的应答特性.