小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建

• 作者: 姜旭淦 王文斌 王胜军 王锁英 眭建 胡嘉波 许化溪 陈巧林 马斌 黄新祥
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: T-bet RT-PCR 基因克隆 重组质粒 腺相关病毒载体
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 184-188
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3665字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2006.03.009

摘要

目的:构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体.方法:利用RT-PCR方法,从Balb/C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,经测序证实后插入Pzac2.1质粒,用磷酸钙沉淀法,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,并通过抽提病毒DNA进行PCR扩增鉴定重组病毒的形成,设立eGFP基因为对照.结果:1592 bp的小鼠T-bet基因被成功克隆,分析表明,与Genbank中发表的序列相比具有99.8%的同源性.重组质粒Pzac2.1-T-bet的PCR及酶切鉴定表明T-bet基因被定向插入,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞包装成病毒后,经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测,证实已完成对重组病毒的包装.结论:成功构建了小鼠T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV-T-bet,为免疫紊乱性疾病的T-bet基因干预治疗奠定了基础.