H9N2亚型禽流感病毒ns1基因克隆

• 作者: 张志珍 林东子 梁念慈
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: H9N2亚型禽流感病毒 ns1基因 克隆 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1791-1792
• 页数: 2页
• 分类号: R3
• 字数: 2502字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2006.12.005

摘要

目的 克隆A/Duck/Shantou/2088/01(H9N2)亚型禽流感病毒ns1基因,构建重组融合表达载体.方法 采用常规PCR方法扩增ns1基因cDNA,将扩增产物克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-3中,构建重组质粒pGEX-4T-3/ns1,转化BL21(DE3)宿主菌;采用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切和序列分析鉴定插入的ns1基因;并用IPTG诱导工程菌,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达.结果 双酶切鉴定表明,ns1基因已正确克隆到GST融合表达载体中,测序结果证实ns1基因序列与目的基因序列完全一致.SDS-PAGE电泳显示,融合蛋白在BL21(DE3)工程菌中以可溶形式表达,重组融合蛋白GST-NS1的表达量占菌体总蛋白的20%左右.经Western blotting分析证实,重组融合蛋白可以被GST特异性抗体所识别.结论 本实验成功克隆了H9N2亚型禽流感病毒ns1基因,构建了融合表达载体,并进行了融合蛋白的诱导表达,为进一步研究NS1蛋白在流感流行中的作用打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	252	1946	22.0	32.0
2	张志珍	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	29	51	4.0	5.0
3	林东子	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	3	9	1.0	3.0