大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

• 作者: 李振国 杨期东 毛诗贤 王改青 黄晓松
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 水解酶类 动物实验
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 85-87
• 页数: 3页
• 分类号: R742
• 字数: 4856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.02.030

摘要

目的:观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变.方法:实验于2004-09/2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室(实验室B级)完成.选择青龄(2月龄)健康雌性SD大鼠10只,老龄(20月龄)健康雌性SD大鼠10只.①反转录反应:反应体系20μL,取5 μg(2μL)总RNA,加1/gL Oligo(dT)18 0.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水8.5 μL,70℃保持5 min,然后冰上骤冷30 s,短暂离心3～5 s,再加5×反转录buffer4 μL,10mmol/L dNTPMix 2μL,4U/μLRnasin 05 μL,焦碳酸二乙酯处理过的水1.5μL,轻轻混匀、离心3～5 s,37℃保持5 min,最后加200 U/μL M-Mulv反转录酶1μL,42℃保持1 h,70℃保持10 min变性,冰上冷却10 min,反转录产物(cDNA)于-20℃保存备用.②聚合酶链反应:总反应体系25μL,包括10×聚合酶链反应buffer 2.5μL,25 mmol/L氯化镁1.5μL,10 mmol/L dNTP 1μL, 2 U/μLTaq酶0.5 μL,上述反转录产物cDNA 2μL,50μmol/L上游目的引物0.5μL,50 μmol/L下游目的引物0.5μL,ddH2O16.5μL.各程序均采用95℃5 min预变性,94℃,45 s、退火温度30 s,72℃1 min进行32个循环,最后72℃延伸10 min.退火温度,去整合蛋白和金属蛋白水解酶10:62.3℃;去整合蛋白和金属蛋白水解酶17:50.2℃;肌动蛋白:46℃.取聚合酶链反应产物5 μL于15g/L琼脂糖凝胶电泳,然后在凝胶图像处理系统上扫描,测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值,分别计算其比值,即目的基因值=目的基因吸光度值/肌动蛋白吸光度值.结果:纳入动物20只,均进入结果分析.①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平(1.2170±0.430 8)低于青龄大鼠(1505 0±0.495 8),但两组比较差异无显著性(t=1.239,P＞0.05).②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平(1.572 0±0.567 0)高于青龄大鼠(0.974 0:±0.328 1),但两组比较差异无显著性(t=-1.476,P＞0.05).结论:去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨期东	中南大学湘雅医院神经内科	319	2510	23.0	33.0
2	王改青	中南大学湘雅医院神经内科	11	52	4.0	7.0
3	毛诗贤	中南大学湘雅医院神经内科	6	21	3.0	4.0
4	李振国	中南大学湘雅医院神经内科	11	25	4.0	4.0
5	黄晓松	中南大学湘雅医院神经内科	11	147	5.0	11.0