苏云金芽孢杆菌chiA,chiB全基因的克隆、表达及其序列分析

• 作者: 卢伟 肖亮 蔡峻 陈月华 陈艳玲 韩苗苗
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 ChiA ChiB 组成型表达 序列分析
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 843-848
• 页数: 6页
• 分类号: Q933
• 字数: 5177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2007.05.019

摘要

以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF 103273和DQ 512474).将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,获得重组质粒pUCm-chiA和pUCm-chiB,分别转化E.coli XL-Blue.克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自的蛋白,不需要几丁质作为诱导物.表达的几丁质酶能够分泌到胞外.证明15A3菌株可组成型表达2种几丁质酶.经核苷酸及氨基酸序列分析证明,chiA基因全长1426bp,含有343 bp的上游非编码区和1083 bp的ORF,编码360个氨基酸.推测成熟蛋白分子量为36kD,只有一个几丁质酶催化域.chiB基因全长2279 bp,含有248 bp的上游非编码区和2031 bp的ORF,编码676个氨基酸.推测成熟蛋白分子量约为70.6kD,具有三个功能域.核苷酸序列分析显示chiA和chiB的启动子所处的位置及转录起始碱基都不相同,-35区相同,而-10区有两个碱基不同,SD序列也不完全一致.