单启动子p53/p14ARF非融合表达载体的构建及其在MG-63中的表达鉴定

• 作者: 李进 杨渝珍 杨述华 梅荣成 邹利军
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 非融合表达 pIRES-p53-p14ARF 细胞凋亡 基因突变
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 234-239
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 4676字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2007.03.010

摘要

目的 构建单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的影响及其功能初探.方法 将p53与p14ARF全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中,并通过PCR、酶切鉴定重组质粒.用Lipofectamin 2000将野生型pIRES-p53-p14ARF真核表达载体转染MG-63细胞,48 h后采用axiovent200型倒置显微镜、荧光免疫细胞化学,观察其在细胞内的表达并初步探究其抑瘤功能.结果 成功构建出含p53与p14ARF全长基因片段的单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF.RT-PCR,酶切鉴定质粒大小、位点均符合实验设计.荧光免疫细胞化学检测显示p53阳性细胞同时也表现为p14ARF免疫反应阳性,转染后瘤细胞可见散在凋亡现象.结论 pIRES-p53-p14ARF非融合表达载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨述华	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	562	4404	28.0	40.0
2	李进	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	111	836	15.0	23.0
3	杨渝珍	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	36	111	5.0	9.0
4	梅荣成	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	10	42	4.0	6.0
5	邹利军	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	10	31	4.0	5.0