在Hep G2细胞中利用siRNA沉默GFP基因的实验探讨

• 作者: 陈旷
• 来源期刊: 江汉大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 小分子双链RNA RNA干扰 Hep G2 绿色荧光蛋白基因 肝癌细胞株
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 医学与生命科学
• 页码范围: 73-76
• 页数: 4页
• 分类号: Q74|R735.7
• 字数: 3301字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0143.2007.03.020

摘要

目的:通过探讨小分子双链RNA(siRNA)通过RNA干扰(RNAi)机制沉默肝癌细胞株Hep G2荧光素报告基因GFP的各项生物学指标,为进一步实验和临床研究提供依据.方法:通过体外实验,对siRNA和siRNA脂质体的稳定性和细胞毒性进行评估;通过荧光标记技术,研究不同时间siRNA脂质体的转染效率;通过荧光显微镜下观察转染细胞和RT-PCR检测靶基因mRNA表达,确定不同种类、形式、剂量的siRNA对靶基因的沉默效能.结果:在空白培养液中,siRNA和siRNA脂质体可稳定至4 h,在5%血清中2～4 h后明显降解;100 nM的siRNA和siRNA脂质体无明显细胞毒性;siRNA脂质体转染细胞株的效率随时间不同而不同,4 h可达90%;非特异性siRNA/脂质体无沉默靶基因表达作用,特异性siRNA/脂质体对靶基因的沉默作用在一定范围内随剂量升高(20nM、50nM、100nM)而升高.结论:siRNA的稳定性可满足实验需要,且无明显细胞毒性,特异性siRNA转染肝癌细胞株能有效抑制靶基因表达,用脂质体转染可提高转染效率.siRNA通过RNAi机制沉默靶基因表达,为肿瘤的治疗和基础研究提供了新的工具和思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈旷	华中科技大学同济医学院基础医学院	11	36	4.0	5.0