人淋巴细胞-NT3基因工程细胞的建立及鉴定

• 作者: 徐琳 陈杰 顾香芳 高下 麻晓峰
• 来源期刊: 听力学及言语疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经营养素-3 基因克隆 淋巴细胞 转染
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 394-396,399,插图5-2
• 页数: 5页
• 分类号: R764.4
• 字数: 5280字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7299.2007.05.020

摘要

目的 建立能够存活较长时间并稳定表达神经营养素-3(neurotrophin-3,NT3)的人淋巴细胞株,为后续的动物和人体耳蜗内基因转染实验奠定基础.方法 从正常人全血中通过Ficoll液提取人淋巴细胞,并在其完全血清培养基中加入白细胞介素-2(IL-2)使其良好生长.通过RT-PCR得到人胎肝组织的NT3cDNA,以T4DNA连接酶和真核表达载体pIRES-DsRed2相连接.以阳离子脂质体作为载体,将pIRES-DsRed2-NT3转染人淋巴细胞,进行RT-PCR及Western Blot分析鉴定.结果 建立了一种能使体外培养淋巴细胞成活时间延长的新方法,成功转染NT3基因至淋巴细胞中,并能继续存活相对较长时间,Western Blot证明细胞上清液中有NT3,构建了稳定表达NT3的人基因工程淋巴细胞.结论 构建重组质粒pIRES-DsRed2-NT3,利用淋巴细胞作为中介宿主,进而表达、分泌NT3,为进一步NT3基因转染致聋动物耳蜗实验奠定了基础,并有可能为人体基因转染治疗耳聋找到很好的中介细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐琳	东南大学临床医学院	11	30	4.0	5.0
3	顾香芳	南京大学医学院附属鼓楼医院科研部	10	31	4.0	5.0
4	高下	东南大学临床医学院	3	7	2.0	2.0
5	陈杰	南京大学医学院附属鼓楼医院耳鼻咽喉头颈外科	51	239	8.0	14.0
6	麻晓峰	东南大学临床医学院	12	22	2.0	4.0