人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定

• 作者: 仇灏 刘可人 吴士良 朱琍燕
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2) RNAi SGC7901 细胞
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 102-104,110
• 页数: 4页
• 分类号: Q53|R34
• 字数: 2057字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2007.02.003

摘要

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNAi载体.方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGalNAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA Oligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平.结果:采用RNAi技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低.结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础.