反向PCR法克隆芳香烃龙胆酸降解途径中诱导型龙胆酸1,2-加双氧酶基因

• 作者: 徐亚同 赵渝 郭鲁申 陆贻通 高林
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 芳香烃 龙胆酸 诱导酶 反向PCR法
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 87-92
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5309字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687X.2007.01.020

摘要

龙胆酸1,2-加双氧酶(GDO)是芳香烃龙胆酸途径的一个关键酶.产碱假单胞菌P25X具有保守性与诱导性各一组GDO同工酶,突变株SNZ28的保守型龙胆酸1,2加双氧酶基因(GDO Ⅰ)被链霉素/奇霉素抗性基因打断,但在含有龙胆酸盐的基本培养基上,仍能明显观察到GDO的活性.由龙胆酸诱导生长的SNZ28全蛋白二维电泳结果分析,获得了一个与Ralstonia sp.U2的GDO酶有极高同源性的蛋白点.根据对该蛋白点的N端和Q-Tof测序的结果, 设计了一对简并引物,克隆了诱导型GDO酶的片段,通过对此片段的分析,设计了逆向PCR引物,利用Southern blot杂交, 确定了合适的限制性内切酶(Sal Ⅰ和Sph Ⅰ),以单一酶切的P25X基因组DNA自联后的产物为模板, 进行反向PCR.测序表明,获得了一段1 047 bp与Ralstonia sp.U2.的龙胆酸1,2-加双氧酶具有极高同源性的序列.研究结果揭示了SNZ28中存在诱导型GDO酶.本文中也对不同来源的GDO酶进行了比较研究,其结果为进一步对生物降解基因的进化研究打下了基础.图4 表2 参16

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐亚同	华东师范大学资源与环境科学学院	146	2252	29.0	39.0
2	赵渝	华东师范大学资源与环境科学学院	26	106	7.0	9.0
4	陆贻通	上海交通大学资源与环境系	92	1950	25.0	41.0
7	郭鲁申	上海师范大学生命与环境科学学院	9	66	5.0	8.0
8	高林	上海师范大学生命与环境科学学院	4	16	3.0	4.0