特异性抗细胞表面分子单链抗体的分离和鉴定

• 作者: 何一心 刘俊霞 吴立华 孟磊 宋增璇 徐洁 许静
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示 引导选择 表面分子 单链抗体
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 839-841,846
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3022字
• 语种: 中文

摘要

目的:从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离和鉴定抗造血干/祖细胞表面分子单链抗体(scFv),克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布.方法:用完整的KG1a细胞吸附法富集文库3轮,再用CD44单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离单克隆后用间接免疫荧光法鉴别其细胞结合特异性.对具有不同细胞结合特异性的克隆进行DNA序列分析,用一级结构不同的单链抗体作免疫印迹鉴别抗原分子量.结果:间接免疫荧光结果显示,64个阳性克隆分别识别不同的细胞系,分属3种细胞结合谱,DNA序列测定结果证明C95、H1两个克隆具有独特的一级结构,利用Western blot成功测定它们特异性识别KG1a细胞膜蛋白的表观分子量分别为34 kD/22 kD.结论:成功建立了分离和鉴定抗细胞表面分子phage-scFv单克隆的方法,并从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离出2个抗造血干/祖细胞的特异性克隆.