梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测

• 作者: 刘宏 周民生 牛建新 赵英 马兵钢
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 梨 库尔勒香梨 苹果褪绿叶斑病毒 原位PCR
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 果树
• 页码范围: 53-58
• 页数: 6页
• 分类号: S661.2
• 字数: 3777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0513-353X.2007.01.011

摘要

为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术,用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料,利用DIG标记,研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术.包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响,退火温度、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响.结果表明:RNasin的用量大于0.2 U·μL-1时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达1.0 mmol·L-1时才能生成一定量的cDNA;AMV浓度在0.3～0.5 U·μL-1均可进行正常的逆转录,而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多;引物浓度达到0.9 μmol·L-1以上时才能进行有效的逆转录,并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加.原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃.循环20～30次可出现较强的蓝色信号,引物浓度在0.8～1.2 μmol·L-1时显色较好;Taq酶浓度为20 U·mL-1以上,均显示较深的蓝色;Mg2+浓度为1.5 mmol·L-1就可满足原位PCR所需.获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系,利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证,取得了很好效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵英	石河子大学农学院	16	133	7.0	11.0
2	周民生	石河子大学农学院	1	14	1.0	1.0
3	刘宏	石河子大学农学院	6	59	4.0	6.0