简易快速获得大量高纯度大鼠Leydig细胞

• 作者: 刘伟 周广东 曹谊林 王晓云 邢新
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Leydig细胞 3β-羟类固醇脱氢酶 睾酮 组织工程
• 年，卷（期）: 2007,（z1）
• 所属期刊栏目: 组织工程学
• 页码范围: 86-90
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6702.2007.z1.023

摘要

目的 建立一种简易快速获得高纯度睾丸间质内莱迪希(Leydig)细胞的分离方法.方法 联合应用复合胶原酶消化、400目(30 μm)不锈钢滤网过滤和差速贴壁法获得雄性Wister大鼠睾丸间质内的Leydig细胞.分离细胞经3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)特异性酶学染色、免疫细胞化学检测和流式细胞学进行细胞表型鉴定和纯度分析.将分离细胞进行原代及传代培养,部分细胞同时给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激,观察传代后细胞生长情况,并测定HCG刺激组和非刺激组各代细胞培养上清睾酮水平,评价分离细胞的增殖能力、睾酮分泌功能及对HCG的反应.有血清和无血清2种条件培养液培养原代分离细胞,倒置相差显微镜及电镜观察细胞老化和凋亡状况,优化Leydig细胞的培养条件.结果 应用差速贴壁方法每克睾丸组织(湿重)可获得Leydig细胞(1.5±0.8)×106个,3β-HSD特异性酶学染色、免疫细胞化学检测均呈阳性反应.流式细胞学检测证实3β-HSD阳性细胞率为(95.2±3.7)%.传代后未见明显的细胞增殖,但仍可检测到3β-HSD表达.原代及传代细胞均具有睾酮生成功能,HCG刺激后睾酮分泌水平均明显上升,但原代细胞一定水平的睾酮分泌可持续6 d以上,传代后细胞仅持续48 h.结论 应用差速贴壁法可以获得大量高纯度有活性的Leydig细胞,并可以进行传代培养,且传代前后短期内均可分泌睾酮.该方法简单易行,细胞得率高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢新	第二军医大学附属长海医院整形外科	214	1608	19.0	26.0
2	刘伟	上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室	242	1352	19.0	24.0
3	曹谊林	上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室	42	358	11.0	17.0
4	周广东	上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室	33	154	6.0	11.0
5	王晓云	第二军医大学附属长海医院整形外科	19	135	7.0	11.0