重组蛇毒纤溶酶Fibrolase的复性

• 作者: 史婧 张守涛 郭蔼光
• 来源期刊: 过程工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Fibrolase 大肠杆菌 表达 复性
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 生化工程专栏
• 页码范围: 761-766
• 页数: 6页
• 分类号: Q819
• 字数: 4187字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-606x.2007.04.025

摘要

将Fibrolase基因克隆入表达载体pET25b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%左右.比较了直接稀释法、流加稀释法和透析法的复性效率,同时研究了温度、pH 值、初始蛋白浓度、复性液中盐酸胍浓度和氧化/还原环境等对复性的影响, 得到了较为适宜的复性条件.结果表明,采用流加稀释复性,并在4℃, pH 8.5, 1.5 mol/L盐酸胍, 1 mmo1/L GSSG, 2 mmo1/L GSH, 初始蛋白浓度10 mg/mL及稀释体积为50倍时,复性效率最高.重组Fibrolase蛋白在复性和纯化后的收率可达25%左右.