表达PRRSV GP2a/GP2b、GP3、GP4、GP5和M蛋白重组腺病毒的构建

• 作者: 俞伏松 宋铁英 方勤美 杨金先 林天龙 陈振海 龚晖
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组腺病毒 囊膜蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 221-226
• 页数: 6页
• 分类号: S858.28|S855.3|Q784
• 字数: 4955字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0384.2007.03.001

摘要

以PRRSV FJ-1a株为模板,采用RT-PCR法分别扩增出GP2a/GP2b-3、GP3、GP4、GP5和M蛋白基因片段,双酶切后插入穿梭质粒pDC316.利用AdMaxTM法,将5个重组穿梭质粒分别与腺病毒辅助质粒共转染293细胞,得到重组腺病毒Ad-GP2a/GP2b-3、Ad-GP3、Ad-GP4、Ad-GP5和Ad-M.重组腺病毒滴度为107.7～109.0TCID50·mL-1,而以Ad-GP5滴度最低,仅为107.7TCID50·mL-1.PCR检测第3、6、9代重组腺病毒稳定性,确证重组病毒均能稳定携带目的基因.对目的基因转录的RT-PCR鉴定结果显示,重组腺病毒分别感染293细胞后能转录产生目的基因mRNA.表达PRRSV主要囊膜蛋白基因重组腺病毒的获得,为进一步研制PRRSV基因工程疫苗,解析主要囊膜蛋白功能奠定基础.