细胞周期蛋白D1特异性核酶表达载体的构建及其活性

• 作者: 刘乃丰 夏金荣 胡向阳 黄晓明
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核酶 细胞周期蛋白D1 体外转录 切割
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 122-126
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4362字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2007.01.024

摘要

应用mfold程序对锤头状核酶(ribozyme,Rz)和大鼠细胞周期蛋白(cyclin)D1基因的二级结构进行分析,设计合成锤头状Rz基因,通过RT-PCR扩增获得大鼠细胞周期蛋白D1目的基因,将Rz基因和细胞周期蛋白D1基因分别克隆入载体pGEM-3Zf(+)中,体外转录Rz基因和靶基因并进行切割实验;将Rz基因与逆转录病毒载体pLXSN重组得到Rz真核表达载体pLXSN-Rz,将其转染入HSC-T6细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,用RT-PCR检测细胞周期蛋白D1基因的表达.结果显示:针对目的基因的832位点设计合成了Rz832,成功获得Rz832基因、细胞周期蛋白D1 mRNA的体外转录载体pGEM3Zf-Rz832和pGEM3Zf-cD1,经体外转录出Rz832(105 nt)及细胞周期蛋白D1 mRNA(1 079 nt).体外切割实验证实Rz832能够特异性切割细胞周期蛋白D1mRNA,产生1 014 nt和65 nt的切割产物,切割效率为80%.所构建的pLXSN-Rz832经酶切电泳、PCR鉴定显示,插入的Rz832序列大小约为57 bp,与预期结果相同,经测序证实Rz832序列正确.转染pLXSN-Rz832的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)细胞周期蛋白D1 mRNA的表达受到明显抑制,仅为对照组的42.22%(t=-193.443,P＜0.01),结果表明:Rz832能够在体外特异性切割细胞周期蛋白D1 mRNA、并在HSC-T6细胞内有效抑制细胞周期蛋白D1基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄晓明	东南大学临床医学院	552	11109	50.0	73.0
2	刘乃丰	东南大学临床医学院	171	1070	15.0	23.0
3	夏金荣	东南大学临床医学院	20	98	6.0	9.0
4	胡向阳	东南大学临床医学院	5	37	3.0	5.0