利用DSN和SMARTTM技术构建金龟子绿僵菌产孢时期均一化全长cDNA文库

• 作者: 刘静 夏玉先 张石柱 彭国雄 曹月青 殷幼平 王中康 谢磊
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绿僵菌 产孢基因 全长文库 均一化技术 switching mechanism at 5'end of RNA transcript(SMARTTM) duplex-spe
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 884-887
• 页数: 4页
• 分类号: S188
• 字数: 2954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2007.05.028

摘要

为高效获得与绿僵菌产孢相关的全长cDNA,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMARTTM(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)建库技术相结合的方法,构建了杀虫真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae var.acridum)菌株CQMa102产孢时期的均一化全长cDNA文库.经检测,原始文库滴度为2.1×106cfu/mL,库容量超过6×106.随机挑取100个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95%,插入片段平均长度1 500 bp.小规模测序分析表明,全长基因的比例超过60%.对组成性表达基因3-磷酸甘油醛脱氢酶G3PDH和微管蛋白β-tubulin均一化前后丰度检测表明,其丰度均有大幅度的下降,基本满足节约筛库的要求.