分泌表达人IL-12基因重组卡介苗菌株的构建和筛选

• 作者: 张会东 郝牧 高蕾 鲍朗
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素 穿梭质粒pMV361 电穿孔 基因重组卡介苗
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 186-189
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2007.02.002

摘要

目的 筛选获得分泌表达人白介素12(IL-12)的基因重组卡介苗菌株.方法 采用PCR反应从pORF-h IL-12载体中扩增得到人IL-12基因的完整序列,克隆入大肠杆菌-分枝杆菌(E.coli-BCG)穿梭载体pMV361中,构建含人IL-12基因的重组质粒rpMV-IL-12.将纯化的rpMV-IL-12电穿孔转化卡介苗(BCG),通过卡那霉素抗性筛选、基因组PCR方法进行初步鉴定,再经热休克诱导表达后,分别收集培养上清液和细菌沉淀,进行SDS-PAGE分析,筛选得到IL-12基因重组BCG(rBCG-12).结果 成功构建含人IL-12基因的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒rpMV-IL-12,测序结果与GenBank收录序列一致,未发生突变.rpMV-IL-12电穿孔转化BCG,经卡那霉素抗性筛选及基因组DNA的IL-12目的 片段PCR扩增筛选得到rBCG-12重组菌.rBCG-12热休克诱导表达后的SDS-PAGE电泳,从培养上清液中检测到相对分子质量为70×103的蛋白质条带,而细菌沉淀中未见到特异性条带.结论 分泌表达人IL-12蛋白的重组BCG菌株构建、筛选成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲍朗	四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室	84	212	7.0	10.0
2	张会东	四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室	42	109	6.0	8.0
3	高蕾	四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室	12	57	4.0	7.0
4	郝牧	四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室	7	33	3.0	5.0