大鼠肝脏F蛋白基因的克隆和表达

• 作者: 俞新大 刘树业 宋春娟 张健东 张琚 石欣荣
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝脏 F抗原 大肠杆菌 基因克隆 蛋白表达 大鼠
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 10-14
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3789字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0392.2007.01.003

摘要

目的 获得大鼠肝脏F蛋白基因克隆(F-protein 's cDNA);利用原核(大肠杆菌)表达系统表达大鼠肝脏F蛋白. 方法提取大鼠肝脏总RNA,对其进行反转录和PCR(RT-PCR)扩增出目的基因(F-protein's cDNA),然后将其与pUCm-T载体进行连接获得克隆质粒pUCm-T- F并转化到大肠杆菌DH5α中;将测序结果正确的克隆片断重新与表达载体pET-15b连接,获得F抗原表达质粒pET15b-F并将其转化到表达菌株BL21(DE3)pLysS中,用1 mmol/L IPTG诱导其表达.结果 RT-PCR扩增出的目的基因(F-protein's cDNA),经测序证明与Gene-bank上提供的F蛋白cDNA序列完全一致;表达后的全菌蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白分子量大小约为43 kD,与预期值相符,表达量可达全菌总蛋白量的40%. 结论表达的目的蛋白经His-tag柱进行亲和层析纯化,SDS-PAGE 检测得到了不含其他杂蛋白的单一F蛋白条带,与豚鼠抗人F蛋白抗血清反应成阳性,说明我们经基因工程方法得到的纯化的F蛋白有免疫活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘树业	天津市第三中心医院医学检验中心	131	799	14.0	19.0
3	张琚	南开大学生命科学院	43	441	9.0	20.0
4	张健东	天津市第三中心医院医学检验中心	27	131	5.0	9.0
5	俞新大	南开大学生命科学院	10	59	4.0	7.0
6	宋春娟	南开大学生命科学院	2	0	0.0	0.0
7	石欣荣	天津市第三中心医院医学检验中心	5	13	2.0	3.0