小鼠单抗R5基因的克隆和基于CDR相似性的人源化质粒构建

• 作者: 余君铭 耿建国
• 来源期刊: 浙江大学学报（理学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: R5 抗体基因克隆 人源化 CDR-grafting 表达载体构建 活性检测
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 570-575
• 页数: 6页
• 分类号: Q952.5
• 字数: 4179字
• 语种: 中文

摘要

抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA,逆转录成cDNA,扩增出R5单抗的轻重链基因.分析克隆到的轻重链基因的序列信息,得到互补决定区(CDR)序列信息.构建真核表达质粒并在真核细胞中表达.采用互补决定区移植(CDR-grafting)的方法人源化鼠源单抗R5基因.先从人种系(germline)抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型(CDR canonical structure class)的片段,合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸(overlap extension)的方法得到人源化的VL和VH,并采用双酶切方法分别克隆入昆虫杆状病毒表达载体pAc-k-CH3中,经测序确定序列正确.大抽后的质粒和线性杆状病毒DNA共转Sf9昆虫细胞,表达得到的抗体用ELISA能检测到和抗原的结合活性.轻重链基因的成功克隆和人源化表达质粒的构建及表达为下一步改善人源化R5单抗的特性打下了基础,并向R5单抗的抗肿瘤临床应用迈进了一步,具有重要的意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	耿建国	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院研究生院	8	8	2.0	2.0
2	余君铭	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院研究生院	1	0	0.0	0.0