胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因重组腺病毒载体的构建及其在COS-7细胞的表达

• 作者: 卫积书 吴竣立 孟凯 苗毅 高文涛
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 MUC4 通用Th表位 嵌合基因 肿瘤疫苗
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1358-1362,封2
• 页数: 6页
• 分类号: R392.3
• 字数: 3689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2007.12.003

摘要

目的:构建含有胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因的腺病毒载体,并转染真核细胞COS-7.方法:多参数分析预测MUC4抗原HLA-A1、HLA-A2限制性CD8+T细胞表位kozac序列、引导序列以及通用Th表位PARDE和多表位基因串连后合成嵌合全基因.嵌合基因克隆到腺病毒穿梭载体pAdshuttle-CMV获得重组质粒pAdshuttle-CMV-PE.酶切鉴定后,将正确的重组质粒转化含有腺病毒骨架载体的BJ5183菌进行同源重组.Pac Ⅰ酶切和测序鉴定正确的重组子,脂质体介导转染Ad293细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒(rAd-PE).Ad293细胞反复感染冻融扩增病毒,流式细胞仪和TCID50检测病毒滴度.病毒颗粒感染COS-7细胞,荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达以及SDS-Page分析多表位嵌合蛋白的表达.结果:成功构建了含有胰腺癌MUC4的多表位嵌合基因重组腺病毒,病毒滴度为1×1010 pfu/ml.SDS-Page发现在16 kD处有一符合预期大小的蛋白表达.结论:该重组腺病毒成功构建并能够在真核细胞COS-7中表达,为下一步胰腺癌的肿瘤疫苗研究奠定相应的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗毅	南京医科大学第一附属医院普外科	218	1362	17.0	27.0
2	高文涛	南京医科大学第一附属医院普外科	32	134	6.0	10.0
3	卫积书	南京医科大学第一附属医院普外科	6	10	2.0	3.0
4	吴竣立	南京医科大学第一附属医院普外科	2	1	1.0	1.0
5	孟凯	南京医科大学第一附属医院普外科	3	1	1.0	1.0