荧光定量PCR法在重组逆转录病毒pLXSN-BDNF滴度测定中的应用

• 作者: 原慧萍 周欣荣 李鸿翼 王雅 邵正波
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 逆转录病毒 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 766-770
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 3407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0254-5101.2007.08.022

摘要

目的 制备含大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的逆转录病毒,建立荧光定量PCR测定滴度的方法.方法 扩增BDNF基因,构建重组质粒pLXSN-BDNF,将其转染包装细胞,经G418筛选、病毒浓缩后用荧光定量PCR法和克隆形成法测定滴度.结果 经PCR、酶切和测序鉴定,BDNF基因成功插入逆转录病毒载体中,筛选得到稳定的分泌重组病毒细胞系.重组病毒100倍浓缩后经荧光定量PCR法和克隆形成法测定的滴度分别为6.92×106 拷贝/ml和3.2×105 CFU/ml,两种方法测得的结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功扩增BDNF基因,制备了重组病毒pLXSN-BDNF,建立了荧光定量PCR检测滴度的方法,为基因治疗青光眼性视神经损伤的实验研究提供重要参考指标.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	原慧萍	哈尔滨医科大学附属第二医院眼科	43	193	8.0	11.0
2	王雅	哈尔滨医科大学附属第二医院眼科	9	56	5.0	7.0
3	周欣荣	哈尔滨医科大学附属第二医院眼科	7	51	3.0	7.0
4	李鸿翼	哈尔滨医科大学附属第二医院眼科	3	27	2.0	3.0
5	邵正波	哈尔滨医科大学附属第二医院眼科	9	57	4.0	7.0