鸭乙型肝炎病毒cccDNA Taq Man荧光定量PCR的建立

• 作者: 付美丽 刘小朋 施水兰 李东良 林福海 林青 郑丽雅 陈少华 陈紫榕
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鸭 乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸 共价闭合环状 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 656-659
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2007.07.025

摘要

目的 建立鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法.方法 用pUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染TOP10菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制作外标准品;在DHBV基因组负链两侧设计一对引物,并在引物问设计和荧光标记一段TaqMan探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,建立了DHBV cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法.结果 最低可检出104拷贝/ml;批内误差为0.2%～3.14%,批问误差为2.22%～4.43%;在105～102拷贝/ml之间与Ct值具有很好的线性[Ct=-2.8361ln(χ)+41.45,r=-0.9985].结论 该法是一种灵敏度高、特异性强、较为简便的DHBV cccDNA定量检测技术.