人乳头瘤病毒16型E7基因的原核克隆与表达

• 作者: 夏克栋 张丽芳 赖娟 陈俊
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒16 E7蛋白 原核表达 宫颈癌
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 104-106
• 页数: 3页
• 分类号: R373.9
• 字数: 2861字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2138.2007.02.003

摘要

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papillomavirus HPV)16型E7在原核表达系统中的表达情况和活性,为制备HPV16型E7蛋白疫苗奠定实验基础.方法:通过聚合酶联反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)从HPV16 DNA阳性的宫颈癌组织中扩增HPV16 E7全长基因,进一步将其克隆入原核表达载体pET32a(+),并构建重组质粒pET32a(+)/HPV16 E7,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达的融合蛋白,用镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agarose)纯化,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法(Western blot,WB)分析鉴定.结果:测序证明成功构建重组质粒pET32a/HPV16E7,IPTG诱导下HPV16E7融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的16%,蛋白质印迹鉴定重组E7蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约30×103的可溶性融合蛋白.结论:重组质粒pET32a/HPV16E7在大肠杆菌BL21中高效表达目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈俊	温州医学院微生物学与免疫学教研室	27	127	6.0	10.0
2	张丽芳	温州医学院微生物学与免疫学教研室	74	280	10.0	11.0
3	夏克栋	温州医学院微生物学与免疫学教研室	26	104	6.0	8.0
4	赖娟	温州医学院微生物学与免疫学教研室	1	3	1.0	1.0