牛GDF-9基因的克隆与组织表达的分析

• 作者: 刘永斌 刘美霞 孙洪深 王峰 田春英 田蕾 祁云霞 荣威恒 董文杰 达赖
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 GDF-9 RT-PCR 克隆 mRNA 表达
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 页码范围: 67-70
• 页数: 4页
• 分类号: S823.03
• 字数: 2875字
• 语种: 中文

摘要

为了检测牛GDF-9基因mRNA在怀孕期牛生殖系统的表达情况,为GDF-9基因在雌性动物繁殖上的研究提供一定的理论依据.本试验根据GenBank中报道的牛GDF-9基因序列设计引物,从牛卵巢、输卵管、子宫、肾脏中提取RNA,采用RT-PCR技术进行cDNA扩增,扩增产物与载体pGM-T连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,测序.结果表明,已成功克隆的阳性重组子经测序鉴定其片段大小与预期大小完全一致,为264 bp.序列同源性分析比较表明,该cDNA及其推导的氨基酸序列与绵羊GDF-9cDNA和氨基酸序列同源性分别为97%和94%.以β-actin为内参照物,采用RT-PCR技术进行半定量分析,通过检测比较牛GDF-9基因在卵巢、输卵管、子宫、肾脏组织中mRNA的表达情况.结果表明,牛GDF-9基因在卵巢中表达量最高,在输卵管、子宫、肾脏中均有表达,但表达量不高.