荧光定量RT-PCR测定人颗粒溶素基因表达水平

• 作者: 仲人前 吴传勇 周晔 蒋廷旺 邓安梅 钱琤 陈孙孝 陈波
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒溶素 聚合酶链反应 外周血单个核细胞
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 154-156
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2418字
• 语种: 中文

摘要

目的:通过建立荧光定量RT-PCR的方法,检测颗粒溶素(Granulysin,GNLY)mRNA在人外周血单个核细胞(PBMCs)中基因表达的水平.方法:基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pMD18-T-GNLY,建立荧光定量RT-PCR方法,并检测了40名正常健康献血者外周血中GNLY的表达水平.结果:内参18 S rRNA的动态检测范围为103～108拷贝/μg RNA;而40名正常健康人外周血的PBMCs中均有GNLY mRNA的表达,范围为3.12×106～4.32×107拷贝/μg RNA,均值为[(2.0±1.3)×107]拷贝/μg RNA.结论:建立了人GNLY基因表达水平的荧光定量PCR检测方法,结果准确可靠,为今后进一步研究GNLY mRNA表达水平与感染性疾病免疫机制的相关性研究打下了基础.