猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析

• 作者: 侯俊琳 才学鹏 景志忠 窦永喜 郑亚东 郭爱疆 骆学农
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪带绦虫 45W-4BX 18kD 联合表达 免疫保护性分析
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 385-390
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 5412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2007.02.024

摘要

[目的]获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础.[方法]PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆.测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18.用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性.分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平.感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性.[结果]4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别.重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%.[结论]重组抗原4BX 和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗.