兔外周血内皮祖细胞培养及HTK基因体外修饰

• 作者: 刘春喜 姜虹 张运 李大庆 王旭平 王荣
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 激肽释放酶 内皮祖细胞 动脉损伤 血管病
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1241-1245
• 页数: 5页
• 分类号: Q954.56
• 字数: 2848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2007.11.011

摘要

目的 探讨兔外周血来源的内皮祖细胞(EPCs)经体外基因修饰后能否成功表达目的 基因.方法 分离兔外周血单个核细胞进行定向培养,观察细胞摄取DiI-Ac-LDL的能力,免疫荧光法检测EPCs的细胞表面标记.同时PCR扩增人组织激肽释放酶(HTK)基因,构建以GFP为报告基因的重组真核表达载体,转染体外培养的EPCs后,荧光显微镜下观察HTK-EGFP融合蛋白的表达,通过RT-PCR与ELISA方法检测HTK的表达水平.结果 细胞培养5～6 d开始出现成簇的短梭形贴壁细胞,15 d后形成鹅卵石样细胞层,传代后的细胞能摄取DiI-Ac-LDL,免疫荧光显示vWF和CD133+;pEGFP-HTK重组质粒在EPCs中可以稳定表达,表达的融合蛋白具有HTK和EGFP的双重活性.结论 HTK基因修饰兔外周血EPCs对于血管病的治疗可能具有良好的前景.