鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒构建及表达

• 作者: 周敦金 张小勇 张振华 张正茂 杨东亮 胡权 雷延昌 黄建国
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 鸭乙型肝炎病毒 1.5倍DHBV基因组 鸡肝癌细胞系(LMH) 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 562-564
• 页数: 3页
• 分类号: R575
• 字数: 2804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-0580.2007.05.023

摘要

目的 构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染性克隆,通过体外细胞转染获得单一来源、基因序列清楚的体内实验的感染毒种.方法 以湖北麻鸭DHBV分离株(DQ276978)为模板,用PCR法从该DHBV全基因组克隆质粒(pMD-DHBV)和DHBV阳性血清中获取3部分基因片段,总长4.4 kb,克隆至载体PCR2.1的SacⅠ和NotⅠ酶切位点,构建含1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因的重组质粒,并酶切鉴定其插入方向.将构建的重组质粒经脂质体LipofectineTM 2000导入鸡肝癌细胞系(LMH)细胞中转染表达,收集纯化后的转染细胞培养上清液作为体内实验感染的标准毒种.结果 PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定,证实成功获得正向插入的1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒PCR2.1-DHBV1.5.Southernblot检测表明,该重组质粒在LMH细胞内存在各种病毒复制中间体;通过电镜观察,转染细胞上清液中存在DHBV完整病毒颗粒.结论 经体外重组,构建出携带1.5倍加长DHBV基因组片段的重组质粒PCR2.1-DHBV1.5,并可在鸡肝癌细胞LMH中介导高水平病毒复制,从而获得含可自我复制病毒颗粒的转染细胞上清液作为动物体内感染接种物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨东亮	华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室	127	582	14.0	17.0
2	雷延昌	华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室	13	66	5.0	7.0
3	周敦金		20	302	12.0	17.0
4	胡权		5	27	3.0	5.0
5	张正茂	华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室	13	75	5.0	8.0
6	张小勇	华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室	4	27	3.0	4.0
7	张振华	华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室	16	173	6.0	13.0
8	黄建国		1	11	1.0	1.0