B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定

• 作者: 张立群 段文元 白云 许雪青 陈雪丹 黄钢
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: B7-H1 慢病毒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 24-27
• 页数: 4页
• 分类号: R373|R392-33|R392.2
• 字数: 3178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.01.008

摘要

目的 构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞.方法 以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致.将B7-H1表达载体用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含Blasticidin(终浓度为4.0 μg/ml)的RPMI1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株.结果 PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877 bp基因片段,与预期大小一致.B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞.FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%.结论 成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段文元	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	15	58	5.0	7.0
2	白云	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	99	429	11.0	15.0
3	黄钢	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	20	95	5.0	9.0
4	许雪青	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	31	132	6.0	10.0
5	张立群	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	13	112	5.0	10.0
6	陈雪丹	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	7	36	3.0	6.0